### 培养条件

气相条件：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃。该细胞系名为A549，是由GiardDJ于1972年通过肺癌组织移植建立的，源自一位58岁的白人男性患者。A549细胞能够通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂，且呈角蛋白阳性。这是一种经典的人类肺腺癌细胞系，广泛应用于肺癌研究、药物开发和分子机制探讨。

### 传代方法

首次传代建议为1:2。传代情况为每两天更换培养基。建议用户在购买细胞时同时购买完整培养基，以获得优惠。收到细胞后请处理至良好状态，然后将细胞培养液灌满，封好瓶口，这是运输细胞的最佳方案。在打开瓶盖之前，请核对细胞名称是否符合订购信息，并检查培养瓶是否存在破损或漏液等异常情况。如无异常，请使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照（建议拍摄不同倍数，如40x、100x、200x）。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片，则默认为细胞状态良好。

### 贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速操作，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

### 悬浮细胞传代步骤

1. 采取半换液法，竖着放置培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉3ml培养基，并补充3ml新鲜完全培养基。如果培养基变色较慢，可以直接添加500ul左右的FBS，传代时可直接补充5ml培养基，分为两个培养瓶培养。一般经过三次如此培养后，可进行离心传代。
2. 采用离心换液法时，如需分瓶，可收集细胞悬液至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀，再按1:2的比例分至新T25瓶中，添加6-8ml的新完全培养基。

### 细胞冻存和复苏

细胞在生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，回缩后加入5ml完全培养基终止消化。然后收集细胞至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟并弃去上清。沉淀细胞后加入1ml Agbiotech无血清冻存液，混匀后放入冻存管，最后直接置于-80℃冷冻保存，若后续需转入液氮罐中，须在-80℃保存24小时以上。

细胞复苏时，从液氮中取出冻存管并快速放入37℃水浴中解冻，解冻后用75%酒精擦拭外壁，随后将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25瓶，放入37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。第二天更换新鲜培养基以确保细胞健康。

### 注意事项与问题处理

运输过程中，如发生细胞脱落，属于正常现象。如脱离较多，请收集培养液并离心处理。在细胞活性出现问题时，请在收到产品后的7天内提出真实的实验结果，使用台盼蓝染色法验证细胞活力。具体的处理标准和不予重发的情况也在此列出。

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