近年来，斑马鱼Crispant技术作为基因编辑领域的重要突破，凭借其高效性、低成本与易操作性，已成为疾病机制研究、药物筛选及功能基因组学的理想工具，未来在精准治疗中有望展现更大潜力。Crispant是通过CRISPR/Cas9技术，将Cas9蛋白和靶点gRNA混合（RNP）注射到斑马鱼1细胞期，从而获得的F0代敲除嵌合体斑马鱼（整体敲降），直接用于表型观察和基因功能研究。相较于m啡啉介导的基因敲降技术，Crispant展现出以下优势：

1. 短期观察

Crispant技术能在最短的2周内观察到胚胎期表型，通常在4周内即可提供包括靶点效率验证的完整研究报告。

2. 任意阶段的表型观察

与m啡啉技术相比，Crispant可以在斑马鱼发育的任何时间段观察表型，而m啡啉的作用随着胚胎的发育逐渐降低，通常仅适用于1周内的观察。

3. 低毒副作用

m啡啉常导致毒副作用和非特异性表型的出现，而Crispant技术通过设计多个高效特异靶点，减少了毒副作用，并可通过共同注射多个靶点实现基因完全敲除。

4. 同时靶向多个基因

斑马鱼的目的基因通常有多种亚型，而Crispant能够同时靶向多个基因，降低了致死和非特异性表型的风险。

5. 便于构建稳定品系

Crispant筛选获得的靶点可直接用于稳定敲除斑马鱼品系的构建，从而节省了时间和费用。

应用场景

通过多重sgRNA协同编辑和F0代表型直筛，Crispant技术将基因功能研究的周期压缩至传统方法的1/5，成本降低超过50%。这种高效性、低成本与易操作性，让Crispant成为疾病模型构建、基因功能解析及药物筛选的理想工具。

1. 疾病模型构建

已有研究利用Crispant构建癫痫模型，通过敲除irf2bpl或cars2基因模拟患者的抽搐表型，并进行抗癫痫药物的筛选，如丙戊酸验证。此外，也有用于凝血障碍模型的研究，敲除adcyap1b基因导致凝血因子的下调，表现为自发性出血，适用于抗血栓药物的评价。

2. 基因功能解析

已有研究通过敲除kctd10基因诱导心脏线性畸形，进一步推动心脏发育研究；另外，通过rfx6敲除诱导的糖尿病样表型为胰腺功能研究提供了新思路。

3. 药物筛选

已有研究中，通过敲除斑马鱼中的cars2、Sigirr、cbsb基因等，诱发相关表型，用于神经系统疾病、抗感染与免疫调节、代谢与罕见病及肿瘤个性化治疗等领域的药物筛选。

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